木瓜为蔷薇科木瓜属植物，用途广泛，集观赏、食用、药用于一体。木瓜在我国分布广泛，医学名著《本草纲目》《本草遗拾》等对木瓜的舒筋活络、解渴生津、平肝和胃、去风湿、治霍乱等功效都有详尽的记载。木瓜具有抗肝炎作用，用于治疗腰椎增生性关节炎、前列腺增生、术后疼痛及痹证等症状。近年来的研究表明，木瓜果实中除含有氨基酸、维生素、果胶、有机酸、矿物质等营养物质外，还含有具有生物活性的黄酮类物质。

　　有文献报道木瓜中总黄酮的提取方法采用乙醇提取，但是，这种方法的提取效率仍然较低。近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道，表明其具有耗能低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响。但超声技术应用于提取木瓜叶中黄酮类物质的研究尚未见报道，本文报道用超声波提取木瓜叶总黄酮及鉴别。

1　仪器与试剂

1.1　仪器　JP600G型超声波提取罐（武汉嘉鹏电子有限公司）；UV-755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）； ZF-Ⅰ型三用紫外分析仪（上海顾村光电仪器厂）；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。

1.2　试剂　95%乙醇AR; 60%乙醇AR；亚硝酸钠AR;硝酸铝 AR；氢氧化钠AR;正丁醇AR；三氯化铝AR;盐酸AR;氨水AR;镁粉AR;乙酸镁AR;冰醋酸AR;乙酸乙酷AR;芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；新鲜木瓜叶采自右江民族医学院校园内。

2　方法与结果

2.1　总黄酮成分提取　取新鲜木瓜叶，烘干，粉碎。称取木瓜叶粉末约6g，加80 ml95 %乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤。滤渣再加80 ml95％乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩5～7 ml为止，放置100ml容量瓶中，用 60%乙醇稀释至刻度，得样品液。

2.2　测定方法依据　以芦丁为对照品测定木瓜叶中总黄酮的含量，加人铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。

2.3　定量实验-总黄用的含量测定

2.3.1　波长的选择　取样品液适量，在0.30 ml5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420 700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波长处好的吸收，故测定时选用此波长。

2.3.2　标准曲线的绘制　分别精密吸取芦丁对照液（0.10 mg/ ml)0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于10.00 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 ml,摇匀，静置6 min;再加 10%硝酸铝溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min;再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂作空白参比液，于510 nm处测定吸光度，结果见表1。

表1　紫外可见分光光度计测定芦丁对照液吸光度

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C/mg·ml-1　 吸光度

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0.00　 0.000

0.005　 0.038

0.01　 0.076

0.02　 0.159

0.03　 0.245

0.04　 0.330

0.05　 0.415

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根据上表得回归方程：A＝-6.967 1×10-3＋8.418 1C,r =0.999 9

2.3.3　提取物含量的测定　精密吸取样品液0.50 ml,置10.00 ml 容量瓶，按标准曲线的制备方法测定其吸光度A＝0.409，根据回归方程：A＝-6.967 1×10-3+8.418 1C，计算样品中总黄酮的含量C=0.988 0 mg/ml。

2.3.4　回收实验　精密量取样品液1.00 ml，加入标准芦丁对照品 1.00 ml(0.10 mg/ml），同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为97.79%。

2.4　定性实脸-总黄酮的鉴别

2.4.1　颜色反应　紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。

浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏0.5 min，立即在紫外光下观察，呈很明显的黄褐色荧光斑点。

三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。

乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。

盐酸-镁粉反应：取乙醇提取液1ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（1次加入），在泡沫处呈紫红色。

2.4.2　纸层析　取样品溶液10μl点在滤纸上。用正丁醇，醋酸 :水=4:1:5（体积比）为展开剂，上行展开5 h,取出晾干。喷 1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。

3　讨论

3.1　实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为97.79%，利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、节能的目的，此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。

3.2　黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在自然界中很常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色昔及新黄酮类等。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功能:消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。

　　黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目，木瓜叶分布广泛，本文实验结果表明，木瓜叶中含有较为丰富的黄酮。因此，木瓜叶具有广泛开发和利用价值，值得综合利用加强资源开发。 （时珍国医国药第17卷第10期）

　　产品型号：JP600G型超声波提取/乳化机组

　　机型结构：超声波发生器与提取罐分体式

　　超声频率：28KHz

　　超声峰值功率：1000W （由原600W升级至1000W，价格不变）

　　提取罐内尺寸：直径320 ×高250mm

　　提取罐容积：小于等于20L

　　搅拌电机功率：15W

　　搅拌电机转速：10-30转/min（可调）

　　电加热功率：2KW

　　供电电源：220VAC 50HZ 

　　具有数显时钟可调功能

　　具有数显功率可调功能

　　具有数显扫频可调功能

　　具有数显温度可调功能

　　武汉嘉鹏电子有限公司专业致力于超声波提取/萃取、超声波乳化、超声波清洗、超声波污水处理、超声波酒类醇化产品的研发、生产及销售。公司拥有技术。其中“数字式大功率多用途超声波电源系统”获武汉市重大科技成果奖。数字扫频实现了用户迫切需要的变频要求的同时还弥补了早期双频或多频技术带来的超声转换效率很低的弊端。此项技术经由全国各大院校的用户使用后反应很好。应用于植物提取、乳化、污水处理等领域，院校包括：清华大学、北京大学、浙江大学、华中科技大学、武汉大学、华中师大、中国地质大学、武汉科技大学、上海交大、浙江工业大学、兰州大学、河南农业大学、武汉化工学院、吉林大学、四川大学、华南理工大学、华东理工大学、江汉大学、长江大学、中科院武汉植物所、昆明植物所、中科院过程所、中科院武汉物理所、武汉市药检所等。公司产品行销全国除港、澳、台外的所有省份及直辖市。售后方面：公司产品使用自主技术故性能稳定、质量很好。公司承诺5年内免费质保。用户采用超声波需注意的事项：超声波提取方面：一、被提取物需粉碎到20目或更细。粉碎越细得率越高。二、选用合适的提取溶剂。三、根据产品的特性和产量合理的安排提取工艺。

　　超声波乳化方面：一、乳化液的配方包括乳化剂的用量。二、乳化时间的选定，并不是时间长就越好，乳化过程是分散和聚合不停的循环的过程。按现有试验结果显示10－15分钟的乳化粒径可达100纳米。

　　重要的是数字扫频的选择，此项共有16档选择，数值越低则气泡越粗、力量越大；数值越高则气泡越细、力量越小。不同的提取或乳化物质改变数字扫频会带来不同的效果及效率。

　　超声波提取天然产物包括超声波提取多肽、氨基酸、核酸、各种酶类、单糖、寡糖、多糖、糖蛋白、树脂、胶体物、木质素、维生素、脂肪、油脂、蜡、生物碱、挥发油、黄酮、糖苷类、苯丙素类、有机酸、酚类、醌类、甾体化合物、抗生素类等。